双层琼脂扩散法没有抑菌圈的原因可能是：

　　1、未按要求操作。

　　2、样品中含有抑制菌体生长的物质。

　　3、样品被污染。

　　4、实验室环境不洁净等。

　　可能的解决方法包括：

　　1、按照说明书操作。

　　2、确认样品不含抑制菌体生长的物质。

　　3、对实验室环境进行消毒。

　　4、重新进行实验。