机动车驾驶员实习期内开车上高速不一定会被处罚。

驾驶员在实习期内是可以上高速的，但应当由持相应或者更高准驾车型驾驶证三年以上的驾驶人陪同。无驾驶员陪同或陪同驾驶员不符合要求的，将被处200元罚款。

法律依据：

《机动车驾驶证申领和使用规定》

驾驶人在实习期内驾驶机动车上高速公路行驶，应当由持相应或者更高准驾车型驾驶证三年以上的驾驶人陪同。陪同的驾驶人应乘坐在副驾驶位置，对实习驾驶人进行指导。无驾驶员陪同或陪同驾驶员不符合要求的，将被处200元罚款。